实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题我最近在做pcr,不过身边没有熟练的人,很多基本问题搞不清楚,我用SYBR Green 进行实时定量pcr,看到网上说需要用内参,可是用内参的话,是不是需要用不

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/04/28 04:57:38

实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题我最近在做pcr,不过身边没有熟练的人,很多基本问题搞不清楚,我用SYBR Green 进行实时定量pcr,看到网上说需要用内参,可是用内参的话,是不是需要用不
实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题
我最近在做pcr,不过身边没有熟练的人,很多基本问题搞不清楚,我用SYBR Green 进行实时定量pcr,看到网上说需要用内参,可是用内参的话,是不是需要用不同的颜色?如果在样本中加了目的基因和内参的引物,可是只有SYBR Green一种染料,不就分不出两种基因了么?还是我理解的不对?2.相对标准曲线的话,怎么选择合适的样本?网上说需要一个富含内参和目的基因的样本并梯度稀释,最后根据这个曲线来比较不同样本中目的基因的差异.
额,超时了,补充一句

实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题我最近在做pcr,不过身边没有熟练的人,很多基本问题搞不清楚,我用SYBR Green 进行实时定量pcr,看到网上说需要用内参,可是用内参的话,是不是需要用不
这个就是SYBR GREEN的局限了.你要做内参话,必须在不同的管子里面另外在同时做.就像楼下说的那样.这样的话,不同管子见的加样误差就会干扰实验数据.
内参的目的就是来对照加样误差的.
实际上,真正的内参是在同一个管子里面完成的.不过不是用SYBR GREEN来做的.而是用Taqman 引物和探针组合来做的.在同一个管子里面,同时加入你目的基因和内参基因的引物,而目的基因的探针使用FAM荧光素标记,而内参则使用VIC荧光素标记.这样反应同时进行,而且不受不同管子间加样误差的影响.
标准曲线,一般是使用已知浓度的,带有目的基因的质粒来做的.你说的那个方法,不是标准曲线,仍然是相对浓度的梯度稀释而已.

实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题我最近在做pcr,不过身边没有熟练的人,很多基本问题搞不清楚,我用SYBR Green 进行实时定量pcr,看到网上说需要用内参,可是用内参的话,是不是需要用不怎么判断实时荧光定量PCR标准曲线是否准确实时荧光定量PCR结果中溶解曲线的征集相对定量实时荧光定量PCR的相关问题,原理及注意事项.得回答细点哈. 实时荧光定量pcr内参是什么东西怎么知道自己要买哪个内参请问做实时荧光定量PCR实验时,为什么做标准曲线? 实时定量PCR可以解决什么问题, 本人制作的实时定量PCR标准曲线总不成线性关系,个别样本的浓度达不到设置的标准浓度,请问是什么原因. 关于实时定量PCR的问题想做BDNF基因的实时定量PCR,要用SYBR Green法比较不同组BANF的表达情况.设计好基因引物后怎么做?要不要设计内参,如何分析结果?有哪些步骤流程?我是新手啊,请高手指教. 做实时定量PCR内参引物一般是扩增出来多大片段? 荧光定量PCR和实时荧光定量PCR的区别? 还想再向您请教下关于荧光定量PCR 相对定量内参基因的选择,如果我想用18SrRNA,我该怎么得到这个内参呢实时定量PCR检测的是什么实时定量PCR,定义 StepOnePlus实时荧光定量PCR仪怎么设置融解曲线荧光定量pcr标准曲线中的扩增效率太高怎么办做荧光定量标准曲线,同时做内参β-actin和自己的基因SA,结果内参相关系数为1.000,扩增效率为99.7%,SA相关系数为0.990,扩增效率为137.3%,初始模板浓度实时定量PCR的曲线图怎么看?包括标准扩增曲线,目的基因熔解曲线,目的基因的扩增曲线,都怎么看?三个曲线各有什么意义? 定量PCR标准曲线的线性关系不佳怎么办?