一道实验设计,设计药物质粒中的表达,从目的基因筛选到蛋白质检测,因为本人生化知识尚浅，对于这个问题还可不可以再具体一些，就是有具体的实验步骤

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/05/04 05:27:03

一道实验设计,设计药物质粒中的表达,从目的基因筛选到蛋白质检测,因为本人生化知识尚浅，对于这个问题还可不可以再具体一些，就是有具体的实验步骤
一道实验设计,设计药物质粒中的表达,从目的基因筛选到蛋白质检测,
因为本人生化知识尚浅，对于这个问题还可不可以再具体一些，就是有具体的实验步骤

一道实验设计,设计药物质粒中的表达,从目的基因筛选到蛋白质检测,因为本人生化知识尚浅，对于这个问题还可不可以再具体一些，就是有具体的实验步骤
过程有点小复杂下面是我回答别人的问题的答案,
1.得到目的基因：设计引物（引物上带有酶切位点）→进行PCR,胶回收,酶切,再胶回收,得到带有粘性末端的目的基因→将目的片段连接到具有相同粘性末端的PET载体上
2．得到目的蛋白：将连接好的带有目的片段的载体转入到DH5α菌系中,将菌涂布与相应的抗性LB培养过夜→挑菌→接到相应抗性的液态LB中,摇菌过夜→提取质粒,进行PCR鉴定与酶切鉴定确定转入的不是空质粒→送测→将的到地带有目的蛋白基因的质粒转入到BL21（DE3）菌系中→诱导表达蛋白→进行SDS-PAGE检测是否表达出正确大小目的蛋白→大量诱导→得到表达蛋白的DE3
3.纯化目的蛋白：将菌进行超声破碎→引用Ni-His结合树脂4℃结合过夜→应用不同洗液洗脱得到纯化的目的蛋白→应用BSA对蛋白含量进行定量
4.应用得到的纯化目的蛋白150mg目的蛋白+弗氏完全佐剂对兔子进行一免,以后每次应用150mg目的蛋白+弗氏不完全佐剂加强免疫2-3次（两周加强一次）→最后一次免疫10天后采血→这样就制备得到兔高免血清
5.纯化抗体（可做可不做）：应用抗体纯化试剂盒对得到的血清进行纯化,得到纯化的兔免目的蛋白的多克隆抗体

这个很简单，你将表达这种药物的基因导入到质粒中，首先进行PCR和双酶切筛选，筛选带用目的基因的克隆样本。在对克隆样本分别进行northern blot和werthern blot，在mRNA水平和蛋白表达水平确定其表达了

一道实验设计,设计药物质粒中的表达,从目的基因筛选到蛋白质检测,因为本人生化知识尚浅，对于这个问题还可不可以再具体一些，就是有具体的实验步骤设计实验除去硫酸钾中的碳酸钾写一篇实验设计~ 从实验设计角度来讲,完全随机设计的方差分析和随机区组设计的方差分析有什么区别? 求解一道分析化学实验设计题基因工程实验设计题设计一个实验：使植物水通道蛋白基因在大肠杆菌中表达设计一个实验：让猪的生长激素基因在大肠杆菌中表达设计一个实验：在酿酒酵母中表达植物生长激素实验设计中的不足有哪些该实验设计中的不足之处是质粒转录起始点插入两个碱基会移码突变么?从质粒中插入目的基因,设计引物的时候,目的基因的转录起始密码子ATG前插入了两个碱基,请问是否影响目的基因的正常表达?或者造成移码突变? 从土壤中分离菌株的实验设计设计一个从土壤环境中选择性分离某种细菌的实验方案.可以以厌氧固氮菌为例,设计实验. 分析设计中从哪些方面进行情感设计的表达? 关于构建质粒的cDNA药物处理细胞后某基因过表达了,想构建该基因的过表达质粒,是否可以用药物处理细胞后提RNA逆转录成cDNA再P全长再连接质粒?这种方法可取吗? 什么是代谢拮抗?举例说明代谢拮抗原理在药物设计中的应用. 解释真核细胞表达质粒中的元件及其所赋予质粒的特性.这些元件有：Pcmv,T7,BGHpa,SV40pa,f1 ori,SV40 ori,pUC ori,Ampicillin,Neomycin. 请问什么是穿梭质粒载体和表达质粒载体? 鱼鳍在游泳中的作用?以及实验设计? 穿梭质粒既可以做克隆质粒也可以做表达质粒吗您好,瞬时转染所用的质粒是病毒载体质粒还是真核表达载体质粒? 要设计一个微生物实验设计.请问你知道怎么从豆豉中培养的很多细菌中筛选出“产纤溶活性酶芽孢杆菌”