作业帮测定乳酸菌需要测大肠菌群和菌落总数么
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/28 15:44:31
测定乳酸菌需要测大肠菌群和菌落总数么
测定乳酸菌需要测大肠菌群和菌落总数么
测定乳酸菌需要测大肠菌群和菌落总数么
乳酸菌的检测：
一 概述
乳酸菌是指一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸,需氧和兼性厌氧,多数无动力,过氧化氢酶阴性,革兰氏阳性的无芽胞杆菌和球菌.这类细菌在自然界分布广泛,可栖居在人和各种动物的口腔、肠道等器官内,在土壤、食品、饲料、水及一些临床标本中都有乳酸菌的存在.乳酸菌在工业、农业和医药等与人类生活密切相关的领域应用价值很高,相当多的乳酸菌对人、畜的健康起着有益的作用,但个别菌种能对人畜致病,乳酸菌主要包括23个属的细菌.
二 样本采集
检样主要为含乳酸菌活菌的饮料和微生态制剂,样本应放入冰箱保存,心快检验.
三 检验方法（中华人民共和国国家标准 乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验GB／T 16347-1996）
乳酸菌菌总数的测定：乳酸菌菌落总数是指标样在一定条件下培养后,所得1ml检样中所含乳酸菌菌落的总数.
（一）检验程序
乳酸菌菌落总数检验程序如下：
（二）培养基和试剂
改良TJA培养基（改良番茄汁琼脂培养基）；改良MC培养基（modified Chalmers培养基）；0.1％亚甲蓝牛乳培养基；6.5％氯化钠肉汤参照；pH9.6葡萄糖肉汤；40％胆汁肉汤；淀粉水解培养基；精氨酸水解培养基；乳酸杆菌糖发酵管；七叶苷培养基；革兰氏染色液；3％过氧化氢溶液；蛋白胨水、靛基质试剂；明胶培养基；硝酸盐培养基、硝酸盐试剂；生理盐水：定量分装于三角瓶和试管内灭菌.
（三）操作步骤
1．以无菌操作将经过充分摇匀的检样25ml（或25g）放入含有225ml灭菌生理盐水的来菌广口瓶内做成1：10的均匀稀释液.
2．用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1m,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液）.
3．另取1ml灭菌吸管,按上述操作顺序,作10倍增稀释液,如此每递增一次,即换用1支1ml灭菌吸管.
4．选择2～3个以上适宜稀释度,分别在作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿.
5．稀释液移入平皿后,应及时将冷至50℃的乳酸菌计数培养基（改良TJA或改良MC）注入平皿约15ml,并转动平皿使混合均匀.同时将乳酸菌计数培养基倾入加有1ml稀释液检样用的灭菌生理盐水的灭菌平皿内作空白对照,以上整个操作自培养物加入培养皿开始至接种结束须在20min内完成.
6．待琼脂凝固后,翻转平板,置36℃±1℃温箱内培养72h±3h取出,观察乳酸菌菌特征,选取菌落数在30～300之间的平板进行计数.计算后,随机挑取5个菌落数进行革兰氏染色,显微镜检查并做过氧氢酶试验.革兰氏阳性,过氧化氢酶阴性,无芽胞的球菌或杆菌可定为乳酸菌.根据证实为乳酸菌菌落计算出皿内的乳酸菌数,然后乘其稀释倍数即得每亳升样品中乳酸菌数.例如,检样10－4的稀释液在改良TJA琼脂平板上,生成的可疑菌落为35个,取5个鉴定,证实的乳酸菌的4个,则1ml检样中乳酸菌数为：
35×4／5×104＝2.8×105
7．乳酸菌在改良TJA和改良MC培养基上菌落生长形态特征.
（四）乳酸菌的鉴定
对上述分离到的乳酸菌需进行菌种鉴定时,则作以下试验.
1．菌种制备 自平板上挑取菌落,接种于改良TJA或改良MC琼脂斜面,于36℃±1℃,24～48h培养,刮取菌苔,分别进行下列试验.
2．乳酸杆菌鉴定试验 极少见还原硝酸盐,不液化明胶,不产生靛基质和硫化氢.
3．常见乳杆菌属内种的碳水化合物反应.
4．产酸乳的链球菌的鉴别试验.