细胞冷冻保存的关键要注意的问题是什么?

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/05/05 14:45:34

细胞冷冻保存的关键要注意的问题是什么?
细胞冷冻保存的关键要注意的问题是什么?

细胞冷冻保存的关键要注意的问题是什么?
1.配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；
2.取对数生长期的细胞,用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来,悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中、；
3.离心1000rpm,5min；
4.去除胰蛋白酶及旧的培养液,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml；
5.将细胞分装入冻存管中,每管1～1.5 ml；
6.在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者；
7.冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时,可增至-5℃～-10℃/
min；到-100℃时,则可迅速浸入液氮中.也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内.
8．从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存,但最好为对数生长期细胞.在冻存前一天最好换一次培养液；
9．将冻存管放入液氮容器或从中取出时,要做好防护工作,以免冻伤；
10．冻存和复苏最好用新配制的培养液.

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